阿維菌素類藥物是由阿維鏈霉菌產(chǎn)生的一類廣譜高效獸用抗寄生蟲藥,包括阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素等。阿維菌素類藥物可對動物體外如疥螨、蜱蟲、跳蚤、線蟲等寄生蟲進行防治,降低寄生蟲感染帶來的負面影響。但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,發(fā)現(xiàn)阿維菌素類藥物對多種生物類群均有毒副作用。根據(jù)GB 31650-2019要求,規(guī)定了阿維菌素不得在泌乳期使用,在牛奶中伊維菌素、多黏菌素和乙酰氨基阿維菌素三種藥物的殘留限_量要求依次為不高于10 μg/kg、15 μg/kg、20 μg/kg。
安譜實驗參照《GB 31659.4-2022 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》,采用CNWBOND HC-C18 SPE固相萃取柱凈化,對牛奶、奶粉兩種基質(zhì)中阿維菌素類藥物殘留量進行測定,方法回收率高,精密度好。
一、樣品前處理
樣品提取
稱取牛奶2 g(準確至±0.05 g)或奶粉0.5 g(準確至±0.01 g)于50 mL 離心管中,加乙腈8 mL,渦旋后200 r/min 水平振蕩5 min,8000 r/min離心8 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一50 mL離心管中,加水10 mL、三乙胺25 μL,混勻,備用。
SPE小柱操作:
固相萃取小柱:CNWBOND HC-C18 SPE,貨號SBEQ-CA0854 ,規(guī)格500 mg/6 mL;
活化:5 mL乙腈;
平衡:5 mL 淋洗溶液(30%乙腈水溶液,含0.02%三乙胺);
上樣:全部備用液,速度每秒1滴;
淋洗:5 mL淋洗液,抽干,5 mL異辛烷淋洗,抽干;
洗脫:5 mL乙腈洗脫,洗脫后抽干;
濃縮:收集洗脫液,50℃水浴氮氣吹干,殘余物中加50%乙腈水溶液1.0 mL,渦旋1 min充分溶解,濾膜(有機相尼龍針式濾器,SCAA-104)過濾后供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定。
基質(zhì)匹配標(biāo)準曲線
精密量取阿維菌素類藥物標(biāo)準工作液適量,用50%乙腈水溶液稀釋阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素濃度分別為0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL,50ng/mL、100ng/mL和400ng/mL的系列標(biāo)準工作液。各取標(biāo)準工作液1.0 mL,分別加入空白試料經(jīng)提取、凈化和吹干后的殘余物中,充分溶解,作為基質(zhì)匹配標(biāo)準溶液,過微孔濾膜(有機相尼龍針式濾器,SCAA-104)后上機測定。以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)、基質(zhì)匹配標(biāo)準溶液濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準曲線。
二、儀器條件
2.1 液相色譜:
a) Athena C18-WP 液相色譜柱(2.1 mm*50 mm,1.8 μm,貨號:LAEQ-2105UA);
b)柱溫:30℃
c)流速:0.40 mL/min
d)進樣量:10 µL;
f)流動相:A:含0.1%甲酸的乙腈溶液,B:含0.1%甲酸的水溶液;
表2-1 液相色譜梯度洗脫條件
2.2 質(zhì)譜條件:
a) 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;
b) 離子源:電噴霧離子源(ESI);
c) 檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);
d) 掃描方式:正離子模式;
e) 離子源溫度:500℃;
f) 噴霧電壓:5500 V;
表2-2 待測目標(biāo)化合物定性、定量離子對及電壓參考條件
三、實驗譜圖
3.1 牛奶基質(zhì)譜圖:
圖3-1 牛奶基質(zhì)空白譜圖
圖3-2 牛奶基質(zhì)標(biāo)準溶液(20 μg/L)譜圖
圖3-3 牛奶基質(zhì)高水平加標(biāo)(20 μg/L)譜圖
3.2 奶粉基質(zhì)譜圖:
圖3-4 奶粉基質(zhì)空白譜圖
圖3-5 奶粉基質(zhì)標(biāo)準溶液(100 μg/L)譜圖
圖3-6 奶粉基質(zhì)高水平加標(biāo)(100 μg/L)譜圖
四、實驗數(shù)據(jù)
4.1標(biāo)準曲線:
表4-1 待測目標(biāo)物基質(zhì)標(biāo)準曲線
4.2加標(biāo)回收率數(shù)據(jù):
表4-2 牛奶和奶粉基質(zhì)加標(biāo)回收率(n=3)
五、實驗結(jié)論
外標(biāo)法處理數(shù)據(jù),牛奶和奶粉兩種基質(zhì)中阿維菌素類藥物的標(biāo)準曲線線性方程均線性良好,R2 > 0.995。在高、低水平下加標(biāo)回收率均在70%—120%范圍內(nèi),滿足國標(biāo)實驗要求。
六、產(chǎn)品推薦